کلونینگ و افزایش بیان موقت ژن nrf۲ در سلول های بنیادی مزانشیمی به واسطه سیستم بیانی آدنوویروسی بر مبنای فناوری gateway

زمینه: افزایش بقای سلول های بنیادی مزانشیمی پس از پیوند، کارایی این سلول ها را در درمان افزایش می دهد. به همین دلیل، دست کاری سلول های بنیادی مزانشیمی با ژن های محافظت کننده سلولی همانند nf-e2 related factor-2 (nrf2) جهت بهبود کارایی سلول درمانی مهم است. هدف این مطالعه، کلونینگ و افزایش بیان موقت ژن nrf2 در سلول های بنیادی مزانشیمی توسط سیستم بیانی آدنوویروسی می باشد. روش ها: ژن nrf2 از سلول های بنیادی مزانشیمی جدا و توسط واکنش توپوکلونینگ، به وکتور pentr/topo/d کلون گردید. سپس با استفاده از فناوری gateway، ژن nrf2 از وکتور pentr/topo/d به وکتور آدنوویروسی منتقل شد. جهت تولید ذرات آدنوویروسی، وکتور آدنوویروسی نوترکیب به سلول های 293a منتقل گردید. در مرحله بعد، آدنوویروس های نوترکیب محتوی ژن nrf2، سلول های بنیادی مزانشیمی را آلوده کردند. یافته ها: ژن nrf2 با موفقیت جداسازی و کلون شد و صحت توالی آن توسط توالی یابی deoxyribonucleic acid (dna) تأیید گردید. افزایش بیان nrf2 مورد ارزیابی قرار گرفت. این افزایش بیان توسط سیستم بیانی آدنوویروس، موقت بود. نتیجه گیری: افزایش بیان ژن nrf2 در سلول های بنیادی مزانشیمی توسط سیستم بیانی آدنوویروس به دلیل بیان موقت آن، یک وسیله بسیار با ارزش می باشد. افزایش بیان دائمی ژن ها در سلول های بنیادی مزانشیمی مجاز نمی باشد.